ATP含量检测试剂盒
ATP Content Assay Kit
AKOP004U-50S
70T/50S
紫外分光光度计
50 Samples
产品信息
ATP Content Assay Kit
50 Samples
紫外分光光度计/1 mL 石英比色皿(d=10 mm)
5 h (50 Samples)
按照标签要求储存
氯仿(CHCl3,MW=119.38,CAS: 67-66-3)
检测原理
己糖激酶(Hexokinase, HK)能够催化葡萄糖和ATP生成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶(Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase, G6PDH)进一步催化6-磷酸葡萄糖和NADP+生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,NADPH在340 nm处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即可定量检测ATP的含量。
  • NADPH速率法
  • 340 nm
  • 递增型
注意事项

①试剂四和试剂六配制后有效期较短,为便于实验安排,均附赠一支作为备用,每支均可满足至少50个样本的检测用量;

②提取过程应严格在冰浴条件下进行;

③测定过程中试剂四应用液、试剂六应用液和待测样本应置于冰上放置,以免变性和失活;

④提取过程中第一次离心后的上清液若为浑浊属于正常现象,不影响检测结果;

⑤提取液出现晶体析出属于正常现象,50-60℃水浴加热至完全溶解,冷却至室温后使用即可;

⑥准确在10 s和190 s处完成吸光值测定,以确保检测结果的准确性和重复性;

⑦若A2测定超出标准吸光值线性范围:高于最高值建议将待测样本使用蒸馏水适当稀释后再进行测定,低于最低值建议制备更高浓度的样本后再进行测定,计算时相应修改;

⑧若吸光值超过3,建议检查比色皿是否为石英比色皿(Q),玻璃比色皿(G)会因材质问题造成吸光值接近或超出设备量程;

⑨提取液中含有蛋白沉淀组分,待测样本不能直接用于蛋白含量测定,若使用蛋白浓度计算ATP含量,则需要另取样本使用PBS或生理盐水按照相同步骤制备为待测样本,再进行蛋白浓度测定;

注: 为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书为准),确认试剂储存和准备是否 充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异交的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。
标准曲线
ATP
y=0.4594x+0.0005 (R2=0.9999)
0.0625-2.0 µmol/mL
0.003 µmol/mL
注:不同仪器及比色材质会对结果产生影响,以实际测定值为准。
引用文献
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