Boxbio@ Frequently Asked Questions
01
Q:如何进行预测定,实验方案如何调整?

A:为了保证测定结果的准确性,避免时间和材料的损失,正式试验前务必取 2-3 个预期差异较大的样本进行预测定,    并制作标准曲线;根据预测定结果确认是否需要调整样本量、提取过程中料液比是否需要调整、过程中料液比是否    需要调整、标准线性是否满足要求等。预实验结果评价过程中的任何问题均可与专属技术专员联系。

02
Q:如何选择合适的比色皿和微孔板?

A:①通常采用玻璃或石英两种材质的比色皿:紫外分光光度法通常使用石英比色皿(口沿处有标有 Q),可见分光光    度法通常使用玻璃比色皿(口沿处有标有 G);②按说明书要求使用1 mL 玻璃/石英比色皿皿(光径=1 cm)、200 μL    微量玻璃/石英比色皿(光径=1 cm)、普通/UV微孔板(光径=0.5 cm)。

03
Q:离心转速和离心力如何设置?

A:说明书中转速有离心力(×g)和每分钟转速(rpm)两种表示方式,具有自动切换功能的可直接设定相应转速    (rpm 或×g),若需要手动转换可参照下列公式计算:

g=r*11.18*10^-6*rpm^2

*注释:r为有效离心半径(即离心机轴心到样品中心位置的长度),单位厘米。

04
Q:分光光度法和酶标仪法试剂盒能否通用?

A:不可以通用,两种试剂盒根据不同的检测环境设计了相应的反应体系和试剂浓度,并按照标准流程进行开发和, 每种试剂盒均有相应的验证数据,若用户自行混用,公司将无法提供相应的技术支持。

05
Q:试剂变色后还可以使用吗?

A:不可以,使用前需要注意观察试剂颜色,若出现变色后则停止使用。

06
Q:按照说明书冷藏后出现沉淀的试剂还可以用吗?

A:可以,试剂盒中含有浓度较高或过饱和试剂,低温会导致溶解度下降进而出现沉淀,建议将试剂恢复至室温,振荡 溶解后使用,若无法解决请及时与技术专员联系。

07
Q:可以改变说明书中加试剂顺序吗?

A:不可以,否则可能造成反应不能正常进行而导致测定失败。

08
Q:吸光度特别高怎么办?

A:检测吸光值应处于标准吸光值线性范围内或符合说明书注意事项中对最高吸光值的要求,若超出规定值应将待测 样品进行适当稀释后再进行检测;也可联系公司工作人员提供相应的技术支持。

       特别注意:紫外分光光度法应使用石英比色皿,若吸光值异常高(吸光值≥3),则表明所使用的是玻璃比色皿或 普通酶标板,需进行更换,同时检查比色皿洁净度和使用规范。

09
Q:为什么∆A 会接近于零?

A:①排除试验异常情况且复测后∆A 仍趋于零,表明反应不能发生:如果是测定酶活性,表明样品可能没有酶活性; 如果是测定某种物质,则表明该样品可能不含有此种物质;

   ②体系中还发生了其它干扰反应,该反应的底物或者 产物在该波长下也有光吸收,并且变化方向相反,几乎抵消了正常酶反应,可以通过设置新的对照排除;

   ③样品 保存不当造成预期指标发生改变,需仔细检查样品处理、采集和保存以及提取状况;

10
Q:为什么∆A 会出现负值?

A:①可逆反应造成:可以通过适当缩短反应时间来防止逆反应的发生;

   ②体系中发生其它干扰反应:该反应的底物 或者产物在该波长下也有光吸收,并且变化方向相反,超过了正常反应,可以通过设置新的对照排除。

   ③反应体系 中存在不溶物或者气泡:颗粒沉淀或者气泡破裂后会导致吸光度显著下降,出现负值,颗粒通常来源于样品粗提 液,可以提供再次离心,确保得到澄清的上清液;气泡可能在反应体系中产生,可以通过降低反应速度(如减少样 在反应体系中产生,可以通过降低反应速度(如减少样品质量提取液体积比)来防止气泡产生。

11
Q:不同样品测定值差异不显著

A:①首先需确认反应是否进行:检查标准组吸光值是否正常、试剂配制是否正常、提取过程是否正常、试剂添加顺序 是否正确等;

   ②样本中待测物含量或酶活较低:适当增加样本量或将样本浓缩后再进行测定;

       特别注意:测定酶活 时若需要使用灭活酶液,需检查是否灭活充分,可适当延长粗酶液灭活时间或更改粗酶液灭活方式。

12
Q:同一样品的平行测定结果差异较大

A:①存在干扰物质:可能样本或操作过程中引入了会对反应体系造成误差的干扰物质,如色素、杂质和不溶物等非 检测成分;

   ②系统误差较大:主要与仪器稳定性和操作精确性相关,建议再对同一样品进行 3 次重复测定,若差异 仍然较大,表明系统误差大,需检查仪器状态是否正常和实验操作是否规范。

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