我的高脂饲料喂养小鼠，血清总胆固醇升高了30%，但甘油三酯没变，这合理吗？为什么同一个血清样本，昨天测的游离脂肪酸是0.5 mM，今天变成了0.8 mM？
脂质代谢研究绕不开这三个指标：总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）。它们是代谢综合征、心血管疾病、非酒精性脂肪肝（NAFLD）研究的标配，但也是容易出错的重灾区。
样本处理方法不同，结果天差地别；试剂盒选错，数据直接作废。今天一次性帮你理清。
概念解读
总胆固醇（TC）：
包括游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）。常用胆固醇氧化酶-过氧化物酶法：胆固醇被氧化生成H₂O₂，H₂O₂与4-氨基安替比林和苯胺类似物反应生成紫色化合物，550 nm测定。一步反应，快速稳定。
甘油三酯（TG）：
甘油三酯经KOH皂化水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛，在铵离子存在下甲醛能够与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，
产物在420 nm处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化即可定量检测甘油三酯的含量 。
注意：血清中游离甘油也会被检测，所以有些试剂盒会设置多试剂体系自动扣除游离甘油空白。如果使用单试剂试剂盒，建议搭配游离甘油检测试剂盒做校正。
游离脂肪酸（FFA）：
又称非酯化脂肪酸（NEFA），是脂肪分解的直接产物，反映脂解活性。常用铜皂法或酶法。酶法特异性更高，但试剂昂贵；铜皂法操作简便，适合大批量样本。
三者关系：TC反映机体胆固醇负荷与代谢状态，TG反映能量储存状态，FFA反映脂肪酸动员和氧化利用水平。高脂喂养后，
TC和TG通常会同步升高，而FFA水平则视胰岛素敏感性和代谢状态的不同，可能下降（被高效摄取储存）、不变或升高（出现脂解逃逸与胰岛素抵抗）。
应用场景划分
血清/血浆：
最常用。采血后及时分离血清，4℃保存不超过48 h，-80℃可长期保存。避免反复冻融。
肝组织匀浆：
肝组织匀浆：用于脂肪肝模型评估。按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例充分匀浆，离心取上清。结果以组织蛋白浓度或组织样本质量表示。
细胞裂解液：
用于脂肪细胞、肝细胞脂质积聚研究。收集细胞后加提取液，冰浴超声破碎，离心取上清。
饲料/食品：
用于高脂饲料配方验证或功能性食品功效评价。需先匀浆或研磨，再提取脂质。
实操方法建议
1.组织样本匀浆要充分
组织样本匀浆要充分：脂肪含量高的组织（如脂肪组织）需用异丙醇提取脂质后再测定，普通匀浆液会分层不均。
2.高脂样本适当稀释
样本中TC>1.2 mM或TG>2.3 mM时，建议用试剂盒配备的提取液稀释2-5倍，保证OD值在标曲范围内。
3.游离脂肪酸检测需注意
在室温下极不稳定，采血后应立即置于冰上并在1小时内分离血清，否则结果会显著偏高；建议使用低吸附离心管和无污染的枪头，以减少非特异性吸附；同时操作过程中避免手直接接触管内壁，远离油性污染源。
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产品货号 |
产品名称 |
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总胆固醇（TC）含量检测试剂盒 |
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甘油三酯（TG）含量检测试剂盒 |
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游离脂肪酸（FFA）含量检测试剂盒 |
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游离胆固醇（FC）含量检测试剂盒 |
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