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实验台上摆着三种蛋白定量试剂盒，你却迟迟不敢动手，BCA、Bradford、Lowry，到底该选哪一个？

你的样本里加了SDS和Triton X-100，BCA法会不会变色异常？你的蛋白是纯化后的单组分，Bradford法会不会太浪费？你的样品浓度极低，Lowry法那漫长的操作步骤，稍不留神就会引入误差。

蛋白定量是实验室最基础的操作，却也是最容易被忽视的翻车现场。方法选错，后续所有Western Blot、酶活测定、细胞实验数据都可能跑偏，审稿人一眼就能看出问题。

今天，我们用大白话帮你把三种方法彻底讲清楚。

概念解读

三种主流蛋白定量方法，各有各的性格和禁区

BCA法（二喹啉甲酸法）：

基于双缩脲原理，碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，BCA鳌合Cu+作为显色剂，产生蓝紫色并在562 nm有吸收峰，单价Cu+与蛋白质呈剂量相关性。

Bradford法（考马斯亮蓝法）：

原理是考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合呈蓝色，在波长595 nm有吸收峰，在一定的范围内与蛋白质的含量呈线性关系。

Lowry法（福林酚法）：

蛋白质在碱性溶液中肽键与Cu2+鳌合，形成蛋白质-铜复合物，还原酚磷钼酸，产生蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质浓度呈线性关系，是蛋白浓度检测经典方法。

应用场景划分

你只需要记住三句话

当你的样本是含SDS等去污剂的RIPA裂解液，且不含高浓度还原剂时→选BCA法，它兼容性强、显色稳定，适合常规蛋白定量。

当你的样本是无去污剂的纯化蛋白或含还原剂的缓冲液，且需要快速读数时→ Bradford法是首选，它操作快、成本低，适合快速筛查。

仅在样本干扰物质少、且追求极高稳定性的特殊场景下→选Lowry法，但因步骤繁琐、干扰多，目前已被 BCA/Bradford 法大量替代。

实操方法建议

不管选哪种方法，这三步通用技巧请收好

1.标准品必须用BSA

牛血清白蛋白是最通用的蛋白标准，梯度稀释后检测，每次实验都要重新核对数据点，当未更改检测设备和比色材质的时候建议挑选某稀释浓度点复测，数据偏移不超过5%情况下可以重复使用该标曲，无需全部重新制作标曲。

2.样品适当稀释

预实验先测一两个样，保证OD值落在标曲中间段。OD太高（>1.5）或太低（<0.1）都不准。

3.空白对照不能省

用提取液代替样品做空白，消除缓冲液本身的吸光度。

BCA法特别注意：37℃孵育后，待冷却至室温再读数，温度波动会影响颜色深浅。Bradford法特别注意：加入试剂后5分钟内完成读数，时间过长会产生沉淀。

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