Boxbio®生化试剂盒标准曲线的制作方法
一、标准曲线的定义与作用
标准曲线（Standard Curve）是一种用于描述物质浓度与其测量信号之间定量关系的曲线，
根据朗伯-比尔定律，在一定条件下物质浓度与其吸收光强度成正比，
即可通过绘制不同浓度标准物质与其对应吸光值的标准曲线作为定量标准，进而检测未知浓度样本中物质的浓度，
同时还可以用于校准仪器和检测环境，以确保测量结果的准确性和可靠性。
Boxbio标准曲线可通过官网进行查询，推荐收到试剂盒后现场制作标准曲线，
以降低因检测环境（如检测设备及材质、环境温度等）不同引起的系统差异；同时可通过建立标准曲线对方法进行校验，
以排除可能出现的异常情况（如操作异常、错加试剂等问题），进而能够快速、准确的得到检测数据。
二、Boxbio试剂盒中标准物质的类型
Boxbio生化试剂盒中标准物质存放在标准品盒1号位中，
同时包含6个用于制备标准稀释液的离心管（如图所示），
标准物质主要有以下两种类型：
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标准品：标准物质粉剂，加入一定体积的溶剂充分溶解，再进行后续标准稀释液的制备
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标准液：标准物质溶液，可直接吸取使用，进行后续标准稀释液的制备
三、Boxbio标准曲线的制作方法
步骤一 标准稀释液的制备
按照Boxbio试剂盒说明书产品内容中“标准稀释液的制备”步骤，
将标准液稀释为6个浓度的标准稀释液，标准液和稀释液的配制比例可参考“标准稀释液制备表格”。
例如葡萄糖含量检测试剂盒（AKSU001C）：将10 mg/mL葡萄糖标准液使用蒸馏水
稀释至0.4、0.3、0.2、0.1、0.05、0.025 mg/mL 即为标准稀释液。
注意事项
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实验前建议检查移液器的准确性，并在稀释过程中保持规范操作，以确保最终稀释浓度的精准；
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标准液稀释的方式主要分为梯度稀释和倍比稀释，
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试剂盒方法中会根据稀释梯度的不同采取单独或组合的方式进行设计；
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若标准液浓度较高时，则需要梯度稀释至低浓度，即首先稀释至中间浓度（表格中A列），
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再由A管梯度稀释制备1-6号标准稀释液，可有效避免直接跨梯度稀释因移液体积过小而造成的误差；
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稀释表格中A管仅用于中间浓度稀释使用，不进行后续反应与吸光值测定；
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标准稀释液仅为标准物质稀释溶液，无吸光值响应，不能直接测定吸光值，
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应按后续步骤加入相应试剂，经过反应后再测定吸光值；
步骤二 标准管和空白管的测定（显色反应）
按照Boxbio试剂盒说明书“2.测定步骤”中加样表格制备标准管（6个）和空白管（1个）
①从6个标准稀释液管中分别吸取对应体积标准稀释液至新的离心管中，空白管中加入相应空载溶剂
②6个标准管和1个空白管中依次加入反应试剂，按照说明书要求完成显色反应
③分别测定每管吸光值，即可得到6个标准吸光值（A标准1-A标准6）和1个空白吸光值（A空白）
④每个标准吸光值（A标准1-A标准6）均减去空白吸光值（A空白），即为∆A标准1-∆A标准6
例如葡萄糖含量检测试剂盒（AKSU001C）：将0.4、0.3、0.2、0.1、0.05、0.025 mg/mL标准稀释液分别吸取100 μL至离心管中，
空白管中加入100 μL蒸馏水，每管中分别加入900 μL检测工作液，充分混匀后37℃显色15 min，反应完成后测定吸光值，
得到6个标准吸光值（A标准1-A标准6）和1个空白吸光值（A空白），
每个标准吸光值（A标准1-A标准6）均减去空白吸光值（A空白），即为∆A标准1-∆A标准6。
步骤三 标准曲线的建立及回归方程的拟合
数据登记
将标准稀释液浓度及对应吸光值数据输入至Excel表格中，建议第一列为标准稀释液浓度数据，
第二列为检测标准吸光值数据（A标准1-A标准6），
第三列空白吸光值，第四列为标准吸光值差值数据（∆A标准1-∆A标准6）
插入散点图
首先选中第一列“浓度数据”，按住【Ctrl键】，再选中对应第四列“∆A标准数据”，
点击工具栏中【插入】选项，在图表选项中，选择【散点图】第一个类型，即可完成散点图插入。
添加趋势线
选中散点图中任意一点，点击【鼠标右键】，选择【添加趋势线】
拟合标准方程
添加趋势线后，右侧出现设置趋势线格式选项，选择趋势线选项中【线性】，
并选择【显示公式】及【显示R平方值】，可以得到标准方程y=kx+b和R平方值。
注：R平方值是衡量拟合优度的指标，可用于评估标准曲线质量，R平方值大于0.99代表数据可用。
图片标注
点击图片可以对图片进行调整和标注，如点击图片右侧“+”图标，可以添加横纵坐标等；
点击图片中坐标轴或点或线，点击鼠标右键，可以设置相应的“坐标轴格式”。
四、Boxbio标准曲线的使用
将样本测定结果（∆A测定）带入标准方程y=kx+b中的y值，
计算x值，再将x值代入说明书中计算公式即可得到最终检测结果。
附件：Boxbio标准曲线制作与使用流程
