一氧化氮（NO）是1998年诺贝尔生理学/医学奖的主角，它在血管舒张、神经传递、免疫防御中发挥关键作用。但你知道NO的半衰期仅有数秒吗？直接测NO几乎不可能。
那文献中铺天盖地的NO含量数据是怎么来的？
答案是：不直接测瞬时NO，检测其稳定代谢终产物硝酸盐（NO₃⁻）和亚硝酸盐（NO₂⁻），间接反映机体NO生成水平。这就是商业试剂盒的通用原理。
概念解读
NO极不稳定，在体内迅速被氧化为NO₃⁻和NO₂⁻。因此，商业试剂盒测定的是总硝酸盐/亚硝酸盐水平，间接反映NO生成量。
检测方法主要有两种：
化学法（Griess法）：NO极易氧化生成NO2-，NO2-在酸性条件下与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550 nm处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化即可定量检测NO的含量。操作简单，成本低，是目前最常用的方法。
硝酸还原酶法：NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2-和NO3-，通过硝酸还原酶将NO3-还原为NO2-，NO2-在酸性条件下与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，再与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550 nm处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化即可定量检测总NO的含量。灵敏度高，但步骤繁琐。
一氧化氮合成酶（NOS）有三种亚型：
nNOS（神经元型）：分布脑和神经组织，参与学习和记忆。
iNOS（诱导型）：主要在巨噬细胞、炎症部位表达，受LPS、细胞因子诱导，产生大量NO参与免疫杀伤。
eNOS（内皮型）：分布血管内皮，产生少量NO维持血管舒张。
根据功能、调控特点可以分为cNOS分型（结构型分型）、iNOS（诱导型分型）和TNOS（总NOS）。
TNOS = cNOS分型（nNOS亚型 + eNOS亚型）+iNOS分型
应用场景划分
内皮功能研究：
NO含量+cNOS活性（血清或组织匀浆）；
炎症模型（LPS刺激巨噬细胞）：
NO含量+iNOS活性（细胞上清）；
神经保护/脑缺血：
cNOS活性+NO含量；
植物抗逆：
NO含量（植物组织匀浆，植物中也存在NO信号通路）如需溯源NO合成能力，搭配植物总NOS活性；
实操方法建议
1.培养上清可直接测定：
细胞上清中NO代谢产物稳定，无需处理。血清建议用超滤管去除大分子蛋白后再测。
2.Griess试剂需避光：
试剂对光敏感，建议现配现用或避光保存。
3.硝酸还原酶法注意标曲：
需以亚硝酸钠为标准品设置标准曲线以量化一氧化氮含量。
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一氧化氮（NO）含量检测试剂盒（硝酸还原酶法） |
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一氧化氮合成酶（NOS）活性检测试剂盒 |
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一氧化氮合成酶分型（TNOS/iNOS/cNOS）活性检测试剂盒 |
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